奶和奶制品残留有机氯化物农药的测定搪玻璃设备

奶和奶制品——残留有机氯化物(农药)的测定

奶和奶制品——残留有机氯化物(农药)的测定 2011年12月04日 来源： 生发灵酊剂为本部研制的一种中药复方外用擦剂，临床用于治疗脱发。处方中主含何首乌。目前测定何首乌中大黄酸的方法有HPLC法。高效毛细管电泳(HPCE)是近年来发展迅速的一种新的分离分析技术，与传统的分离分析手段相比较，具有高效、快速、微量和易于自动化等优势。本实验建立了HPCE内标法测定生发灵酊剂中的大黄酸，简便灵敏、结果可靠，重现性好，能满足生发灵酊的药品质量监控。

1 仪器与试药

Waters公司高效毛细管电泳仪，石英毛细管柱(60 cm×75μ m)，Millennium 32数据处理系统，离心机(ABBOT，美国)；大黄酸、咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所)，生发灵酊剂(100 mL，批号：030612、030626、030718，自制)，四硼酸钠、氢氧化钠均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 缓冲液的配制：精密称取5．74 g四硼酸钠溶于500 mL超纯水中，配成30 mmol／L四硼酸钠电泳缓冲液溶液，磷酸调pH为8．2。

2．2 电泳操作条件：分离电压为12 kV；检测波长为254 nm；进样量为50 kPa×5 S；缓冲液为30mmol／L四硼酸钠溶液(pH 8．2)。每次进样前用缓冲液冲洗毛细管柱10 min，每次分析后用0．1mol／L氢氧化钠冲洗2 min，水冲洗10 min。所用溶液均经0．45 gm纤维树脂膜滤过。上述电泳条件，得电泳图。

2．3 对照品溶液和内标溶液的配制：精密称取大黄酸对照品15．0 mg，置于100 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。吸取上述溶液5 mL置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，配成30ug／mL的大黄酸对照品溶液。精密称取咖啡酸对照品30．0 mg置于100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。吸取上述溶液5 mL置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，配成60,ug／mL的咖啡酸内标溶液。

2．4 供试品溶液的制备：精密量取生发灵酊剂10mL，加2．5 mol／L硫酸10 mL，沸水浴回流1 h，冷却，移至分液漏斗中，用氯仿分4次振摇提取(30、30、20、10 mL)，合并氯仿液，水浴蒸干。残渣加甲醇适量，微热使之溶解，定量转移至50 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取2 mI 溶液到2mL离心管中，10 000 r／min离心15 min。取上清液，用0．45 gm有机滤膜滤过，弃去初滤液，收集续滤液作为供试品溶液。

2．5 阴性对照溶液的制备：按处方比例及生产制备方法，制备不含何首乌的阴性样品，按2．4项下方法制备阴性溶液。

2．6 线性关系考察：精密吸取大黄酸对照品溶液2、4、6、8、10 mL置25 mL量瓶中，分别加内标溶液5 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述电泳条件，分别进样5 S。以对照品质量浓度为横坐标(C)，大黄酸峰面积与内标峰面积比为纵坐标(A)作图，得回归方程A=0．084 9 C-0．015 4，r=0．999 8，表明大黄酸在2．4～12μg／mL和大黄酸峰面积与内标峰面积比线性关系良好。

2．7 精密度试验：同一天配制6、12、20μg／mL大黄酸对照品溶液进行测定，另外同法在不同日内测定，分别计算日内、日间精密度。

2．8 稳定性试验：将同一对照品溶液在相同电泳条件下，分别于0、4、8、12、24 h重复进样5 S，得大黄酸质量浓度的RSD为1．92％ ，表明大黄酸在24 h内测定结果稳定。

2．9 重现性试验：对同一批号样品，分别取样平行测定5次，得大黄酸质量浓度的RSD为2．01 。2．10 回收率试验：精密量取已测知质量分数的生发灵酊剂10 mL于25 mL量瓶中，分别加大黄酸对照品溶液(30μg／mL)2、4、6 mL和内标溶液2．0mL，加甲醇至刻度，依法操作，进样5 S，以大黄酸峰面积与内标峰面积比代入回归方程计算回收率。

2．11 样品测定：取生发灵酊剂3批，精密量取10mL置25 mI 量瓶中，加内标溶液2 mL，加甲醇至刻度，依法操作，进样5 S，内标法计算质量分数。

3 讨论

中药复方制剂中，所含成分复杂，采用HPLC法进行测定时，往往因杂质太多，容易污染色谱柱，使柱效降低。而采用HPCE法进行分析时，由于毛细管柱易冲洗再生，保持高效，使各成分的分离较佳。

本实验曾比较磷酸盐、硼酸-硼砂、四硼酸钠3种缓冲液，发现四硼酸钠对大黄酸的分离最理想。研究表明缓冲液浓度和pH值对分离具有重要影响。高浓度缓冲液可获得较好的分离，但保留时间会变长，而且导致通过毛细管的电流增加，从而增大焦耳热。因此，实验选用30 mmol／L四硼酸钠作缓冲液。pH值选择是决定分离成败的一大关键。采用pH为8．2的四硼酸钠缓冲液时分析时间短，峰形尖锐、对称并达到基线分离。研究表明，柱温降低分离度变好，但柱效减低，分析时间变长。综合考虑分离度和迁移行为的变化，本实验选用25 C柱温较合适。分离电压是毛细管电泳的一项重要参数，实验表明，增加组份的迁移速度是减少谱带展宽、提高分离效率的重要途径，增加电场强度可以达到提高速度的目的。但高场强度导致通过毛细管的电流增加，从而增大焦耳热。在12 kV时，分离选择性最佳。

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